培養 歴史

出典: フリー百科事典『ウィキペディア（Wikipedia）』 (2024/06/29 00:37 UTC 版)

歴史

レーウェンフックが微生物を発見してから19世紀までは、微生物の研究は天然から直接採取されたものを中心になされてきた。野外で採集される原生生物や菌類以外では、微生物観察のための素材として肉スープの腐敗したものがよく用いられた。ただし、これは能動的な培養とは区別する必要がある。

パスツールが酵母の研究を行ったとき、彼は酵母の生理作用に関心を持ち、これを研究するために培養液の成分を検討し培養した。このころが培養の黎明期である。ロベルト・コッホは病原体の研究にあたり、病原体の純粋培養を目的として培養法の基礎となるさまざまな技術を開発した。これらの努力により、20世紀初頭には主要な病原性細菌の大部分が培養され、培養技術は飛躍的に発達した。組織培養も、基本的にはこれらの技術の応用から始まったものである。

培養の必要性

細胞を培養する目的は大きく二つに分けられる。

• 研究対象の維持
  • 採集活動の労力・手間の軽減
  • 目的細胞の選抜（スクリーニング）
  • コンタミネーションのチェック
  • 生活環の解明 : 細胞相の推移、生殖器官の構造や生殖法の観察
• 細胞の大量取得
  • 細胞のロスが生じる観察手段用（電子顕微鏡観察用の試料作成など）
  • タンパク質や核酸、その他の特定物質の抽出
  • 工業的利用（加工用、食用、有用物質の産生と抽出等）

菌類（真菌類）、藻類、原生動物、細菌類（真正細菌/古細菌）などの微生物では、培養は研究を進める上で必須の手段であり、培養方法が確定していない分類群の研究は遅れるのが常である。単に研究対象の維持という点では、冷凍保存が可能な生物もある。なお、培養や冷凍保存により、目的にかなう精度で維持され続けている生物単位は株と呼ばれる。

微生物についての培養技術はパスツール時代から研究が始められ、大きな発展を遂げはしたが、未だに培養ができないもの（VNCと呼ばれる）が大多数である。他方で、遺伝子関連分野の進歩により、近年では環境サンプル（土壌や低泥、海水など）を直接PCRにかけて塩基配列の増幅を行う、いわゆるenvironmental PCRが可能となっている。これにより、形態観察すら出来ない生物、姿形の分からない生物群を系統樹の上で認識できるようになった。environmental PCRは生物個々の情報量という点では貧弱であるが、生物の多様性を認識し、分類の指針を得るという観点では非常に有益な手法であり、培養できない生物の存在を確認できる点では極めて重要である。しかし、そこから得られる情報は極めて限定的であり、やはりその生物の存在が判明した場合には培養法の確立が望まれるし、それなくしては多くを知ることはできない。

培養の種類

純度による分類

粗培養

分離培養とも言う。目的の生物を得るために、自然界から採取してきた土壌や水などを適当な培地・条件で培養すること。ここで生物をある程度増やし、単離（後述）などの分離操作を経て培養の純度を高めていく。

二員培養

寄生性で宿主を要する生物や、従属栄養生物の中で生きた餌の捕食を必要とする生物で用いられる。ウイルスの場合は宿主細胞が必須であるため、必然的に二員培養となる。

単菌培養/単藻培養 (unialgal culture)

目的生物以外の真核生物を含まない培養。そのため、細菌類の混入があってもこう呼ばれる場合が多い。単一の細胞から増殖したことが保証される場合はさらにクローン (clonal) の表記が付く。例外的に、単一の細胞に由来する株であってもオートガミー（繊毛虫のエンドミクシス (endomixis) や太陽虫のペドガミー (paedogamy) ）を行って独自に細胞核を再編する生物では、クローンであることが保証されない。

無菌培養 (axenic culture)

単離や洗浄といった物理的手法、あるいは抗生物質添加等の化学的な処理によって、バクテリアの混入までも排除した培養。一般に言う 純粋培養。

純度の観点からは無菌培養が理想的であるが、無菌株はその作成や維持に技術を要するため、用途に応じた精度の培養を行う必要がある。例えば、16S rRNA系統解析を行うときには原核生物の混入は致命的であるが、真核生物しか持たない分子種である18S rRNAの場合は問題はない。他にも、分類群特異的なプライマーで増幅配列を選択したり、ろ過や遠心分離などの操作で物理的に不要細胞を排除するなどの手段がある。これらの手法は、二員培養系を利用する場合に特に重要である。

どうしても人工的な環境では育たない生物は、植木鉢に植物を植えてそこに接種したり、動物の体内に注入して育てるなど、他の生物そのものを培養環境として用いるという方法もある。パスツールが狂犬病のワクチンを開発したときには、イヌからイヌ、それも直接に脳から脳へ植え継ぐという荒技を行ったと言われる。現在でも、インフルエンザウイルスなどのワクチン製造には鶏卵が用いられる。

液相の置換法による分類

培地添加のタイミングによる分類。すべて液体培地にのみ適用される分類である。

回分培養 (batch culture)

一回毎に新たな培地を用意し、そこへ株を植えて収穫まで培地を加えない方法。個々の培養の品質はバラつくが、コンタミネーションのリスクを分散・低減できる。

流加培養（fed-batch culture, 半回分培養、semi-batch culture）

培養中に、高濃度な培地自体や培地中の特定成分を連続的あるいは間欠的に添加するが、培養ブロスそのものは収穫まで抜き取らない方法。細胞密度を高濃度にしたり（高密度培養）、培養液中のその特定成分の濃度を調節する（多くの場合低濃度に）ことによって目的代謝産物の収量や生産性を高かめたりするなどの目的で行われる。

連続培養（continuous culture）

一定の速度で培養系に培地を供給し、同時に同量の培養液を抜き取る培養法。培養環境を常に一定に保ちやすく、生産性が安定するという特徴がある。反面、一度コンタミネーションが起きると汚染も持続するのが欠点である。

流加培養や連続培養は工業的な用途で用いられることが多い（→バイオリアクター）。研究室における小規模な培養では、特別な装置を必要としない回分培養が主である。

撹乱法による分類

物理的な撹乱を与えるか否かとその方法。これも液体培地にのみ適用される分類である。

静置培養

撹乱を与えない培養法。衝撃に対し脆弱な細胞を増やす場合や、特定の形状のコロニーを作らせる場合などに用いる。

通気培養

熱帯魚の水槽のように、いわゆるバブリングを行う培養法。通気の目的は撹乱ではなく、気体を細胞に与えることにある。気体としては通常の空気の他、藻類など光合成生物の同化効率を上げる為に、二酸化炭素分圧を上げた空気などが用いられる。

攪拌培養

攪拌子（スターラー）やスクリューによって、細胞と培地とを混ぜ合わせる培養法。細胞が効率良く培地成分に接するので、増殖速度の向上が見込める。

振盪培養

0.5-数Hz程度の頻度で培養容器を振り動かし、細胞と培地とを混ぜ合わせる培養法。攪拌培養と同様、増殖速度の向上が見込める。