Ellmanovo činidlo
| DTNB | |
 | |
| Všeobecné vlastnosti | |
| Sumárny vzorec | C14H8N2O8S2 |
| Synonymá | 5,5′-Disulfándiylbis(2-nitrobenzénová kyselina) |
| Fyzikálne vlastnosti | |
| Molárna hmotnosť | 396,34 g/mol |
| Ďalšie informácie | |
| Číslo CAS | 69-78-3 |
| Pokiaľ je to možné a bežné, používame jednotky sústavy SI. Ak nie je hore uvedené inak, údaje sú za normálnych podmienok. | |
Ellmanovo činidlo[1] (5,5'-ditiobis-(2-nitrobenzénová kyselina) alebo DTNB) je chemikália, ktorá sa používa na určenie počtu alebo koncentrácie tiolových skupín vo vzorke.[2] Toto činidlo vyvinul George L. Ellman.
Príprava
[upraviť | upraviť zdroj]V Ellmanovej pôvodnej publikácii[2] bolo toto činidlo pripravené oxidáciou 2-nitro-5-chlórbenzaldehydu na karboxylovú kyselinu, zavedením tiolovej skupiny pomocou sulfidu sodného a následne oxidáciou monomérov pomocou jódu, čím vznikne dimér. Aktuálne je toto činidlo komerčne dostupné.
Ellmanova skúška
[upraviť | upraviť zdroj]Pri reakcii tiolov s DTNB dochádza k štiepeniu disulfidovej väzby, čím vzniká 2-nitro-5-tiobenzoát (TNB-), ktorý vo vode ionizuje na TNB2- dianión v neutrálnom a alkalickom pH. Tento anión má žltú farbu.[1]
Táto reakcia je rýchla a stechiometrická, takže pridanie jedného molu tiolu vytvorí jeden mol TNB. Anión TNB2- sa stanovuje spektrofotometricky pomocou merania absorbancie viditeľného svetla pri 412 nm. Molárny absorpčný koeficient je 14,150 M−1 cm−1 pre zriedené roztoky pufrov[3][4] a 13,700 M−1 cm−1 pre roztoky s vysokou koncentráciou solí, napríklad v 6 M guanídiumhydrochloridu alebo 8 M močoviny.[4] V pôvodnej publikácii v roku 1959 bol molárny absorpčný koeficient pre zriedené roztoky podhodnotený na 13,600 M−1 cm−1 a ako je poznamenané v nedávno publikovanom článku, tento omyl zostáva v literatúre i naďalej.[5] Komerčne dostupné DTNB nemusí byť úplne čisté a môže vyžadovať rekryštalizáciu, aby bolo možné získať presné a reprodukovateľné výsledky.[4]
Ellmanovo činidlo je možné použiť na meranie nízkomolekulových tiolov, ako je napríklad glutatión, v čistých roztokoch i biologických vzorkách, napríklad v krvi.[6] Takisto je pomocou neho možné zmerať počet tiolových skupín v bielkovine.[6]
Referencie
[upraviť | upraviť zdroj]- ↑ a b KUBÍKOVÁ, Eliška. Čerpajme z minulosti, ktorá nás navedie na budúcnosť. Bratislava : [s.n.], 2015. Dostupné online. ISBN 978-80-89747-06-1. S. 116.
- ↑ a b Ellman GL. Tissue sulfhydryl groups. Arch. Biochem. Biophys., 1959, s. 70–7. DOI: 10.1016/0003-9861(59)90090-6. PMID 13650640.
- ↑ Collier HB. Letter: A note on the molar absorptivity of reduced Ellman's reagent, 3-carboxylato-4-nitrothiophenolate. Anal. Biochem., 1973, s. 310–1. DOI: 10.1016/0003-2697(73)90196-6. PMID 4764694.
- ↑ a b c Reassessment of Ellman's reagent. [s.l.] : [s.n.], 1983. ISBN 978-0-12-181991-0. DOI:10.1016/S0076-6879(83)91010-8 [8] Reassessment of Ellman's reagent, s. 49–60.
- ↑ Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4'-dithiodipyridine. Anal Bioanal Chem, 2002, s. 266–76. DOI: 10.1007/s00216-002-1347-2. PMID 12110978.
- ↑ a b Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4′-dithiodipyridine. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2002-07-01, s. 266–276. ISSN 1618-2642. DOI: 10.1007/s00216-002-1347-2. PMID 12110978. (po anglicky)
Zdroj
[upraviť | upraviť zdroj]Tento článok je čiastočný alebo úplný preklad článku Ellman's reagent na anglickej Wikipédii.